Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И.Скрябина

Препарат «Фоспренил» обладает широким спектром биологической активности. Действующим началом являются фосфаты полипренолов. "Фоспренил" относится к противовирусным препаратом, обладающим как непосредственным действием на репродукцию вируса, так и выраженной иммуномодулирующей активностью, влияя на функционирование иммунной системы. Одним из механизмов стимуляции системы естественной резистентности организма является индукция выработки эндогенных интерферонов (ИФН) /1/. Однако механизмы противовирусного и иммуномодулирующего действия Фоспренила еще окончательно не изучены. Нами были проведены исследования прямого и опосредованного противовирусного эффекта препарата. Было выяснено, что "Фоспренил" агглютинирует эритроциты человека, гуся, петуха, морской свинки, мыши и не агглютинирует - собаки и кошки. В опытах с вирусом клещевого энцефалита (ВКЭ) в реакции гемагглютинации было получено полное подавление гемагглютинируюцей активности вируса препаратом /2/.

Нами проводились исследования по воздействию на гемагглютинацию вирусов инфекционный ринотрахеита (ИРТ) и вируса болезни Ньюкасла (ВБН) и на выявление ИФН в перевиваемой культуре клеток под влиянием препарата. Материалы и методы. Исследования по влиянию "Фоспренила" на вирусы ВБН (штамм В1) и ИРТ (штамм "4016") проводили в реакции гемагглютинации. В качестве тест-системы для индикации вирусов мы использовали свежие эритроциты петуха (для ВБН) и мыши (для ИРТ) в 1% концентрации,

Вирус ИРТ концентрировали по нашей методике. В исследованиях на ИФН использовалась перевиваемая культура клеток почки эмбриона коровы Taurus-1 (Т-1), которую заражали вирусом ИРТ (штамм «4016»).Вирус ИРТ титровали на культуре клеток Т-1. Титры вируса оценивали по 50%-ной тканевой цитопатической дозе (ТЦД₅₀).

Для культивирования клеток использовали среду 199 и среду Игла MEM (2x) в равных объемах с добавлением 10% сыворотки крупного рогатого скота. В качестве поддерживающей среды использовали те же среды, но без сыворотки.

Полученные нами пробы вирусного урожая закисляли до рН=3,0 и инкубировали 1ч. Затем доводили рН до 7,2, делали двукратные разведения проб и вносили в культуру клеток. Инкубировали 24ч при 37^oС в атмосфере С0₂ (5%). После титрования вируса энцефаломиокардита мышей (ВЭМК) готовили рабочее разведение вируса с таким расчетом, чтобы в каждую лунку попало 100 ТПД₅₀ и заражали культуру клеток с пробами и без них.

В качестве положительного контроля использовали ИФН человека. Учет результатов проводили по стандартной методике. За 1 единицу активности ИФН принимали величину, обратную максимальному разведению пробы, вызывающую 50%-ную защиту монослоя. В работе использовался стандартный коммерческий препарат «Фоспренил» производства ЗАО «Микро-плюс» при НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН.

Опыты проводили макро и микрометодом. Результаты и обсуждения. Исследования показали подавление гемагглютинирующей активности вируса ИРТ препаратом «Фоспренил» на 2 Iog₂. С вирусом ВБН подобного эффекта не получили.

Полученные результаты могут свидетельствовать о возможном влиянии препарата на адсорбцию определенных вирусов путем блокирования рецепторов, а также, возможно, модификации клеточных мембран. Но мы не исключаем и другие механизмы прямого противовирусного действия "Фоспренила". Опыт по выявлению ИФН показал, что "Фоспрснил" стимулирует синтез ИФН также как и вирус. В клетках с препаратом, зараженных вирусом, установлено увеличение выработки ИФН клетками на 2 lоg₂ по сравнению с выработкой ИФН препаратом или вирусом по отдельности.

Проведенные эксперименты косвенно показали возможность влияния препарата «Фоспренил» на вирус на стадии адсорбции и проникновения. Также было установлено значительное увеличение выработки ИФН, индуцированного "Фоспренилом", что может быть одним из основных механизмов иммуномодулирующего эффекта препарата. Возможно также воздействие "Фоспренила" на другие стадии репродукции вирусов, что является предметом нашей дальнейшей работы.

Литература

1. Danilov L.L., Dccva A.V., Maltsev S.D., Narovlyansky A.N., Ozhcrclkov S.V., Pronin A.V., Sanin A.V., Sosnovskaya O.Yu. «The medicine for prevention and treatment of infectious diseases and correction of pathologic conditions of living organism»/Russ. Pat. Appl. - 1997 - RU 2129867 C1.

2. Ожерелков С.В., Тимофеев А.В., Новикова Г.П., Данилов Л.Л., Мальцев С.Д., Наровлянский А.Н., Санин А.В., Промин А.В. «Противовирусная и иммуномодулирующая активность полипрснолов при экспериментальном клещевом энцефалите». В сб.: Материалы конференции «Актуальные проблемы медицинской вирусологии». - Москва. - 1999-23-24 ноября-Т. 1 с. 110.

Опубликовано: Сборник докладов Международной конференции молодых ученых 5-6 декабря 2002 г. Щелково- 2002